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?細菌總蛋白非變性提取試劑
貨號:ZK-PL3510
產(chǎn)品描述:
細菌蛋白提取試劑Ⅰ(非變性)采用溫和的非離子型去污劑,能夠從細菌中提取得到可溶性蛋白,用細菌蛋白提取試劑Ⅰ(非變性)制備的蛋白產(chǎn)物保持了生物學(xué)活性,適用于后續的Western Blot、免疫沉淀、免疫共沉淀、蛋白純化等實(shí)驗。
適用范圍:
從新鮮或者凍存的細菌中提取蛋白。
規格:
25ml 或 100mL.
儲存:
4℃保存 12個(gè)月有效
提取方法:
1. 將細菌培養物在預先稱(chēng)重的離心管中4oC,5000g離心15分鐘,收集菌體;
2. 去上清,稱(chēng)量菌體重量,按照每克菌體加入10-50ml細菌蛋白提取試劑Ⅰ(非變性),渦旋震蕩使菌體完全重懸;
3. 室溫孵育15-20分鐘(孵育時(shí)間可根據細胞類(lèi)型的不同做調整)。如果蛋白表達量低,建議結合超聲粉碎,置冰上后,采用300w,10s超聲/10s間隔,超聲20min,至菌液變清;若目的蛋白不穩定,可冰孵,且時(shí)間可以減少,裂解液內加入0.2倍體積50%甘油也可以穩定目的蛋白。
4. 15000g,離心10分鐘;
5. 將上清轉移至新的離心管中,即得到可溶性蛋白,可應用BCA法進(jìn)行蛋白定量及后續實(shí)驗。
注意:
1. 該抽提試劑中不含有蛋白酶抑制劑,用戶(hù)可根據具體情況添加蛋白酶抑制劑、還原劑、螯合劑等。
2. 當提取物粘度較高或提取的蛋白以包涵體形式存在時(shí),建議在加入溶菌酶和DNaseⅠ.
3. 如果在提取純化過(guò)表達蛋白的過(guò)程中,得到的大部分蛋白都在沉淀中,那么目的蛋白可能以包涵體的形式存在,可使用包涵體蛋白溶解液進(jìn)行溶液,也可以?xún)?yōu)化蛋白表達條件,增加可溶性蛋白的表達。
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