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豬流行性腹瀉病毒抗體(PEDV)ELISA試劑盒
豬流行性腹瀉病毒抗體(PEDV)ELISA試劑盒
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豬流行性腹瀉病毒抗體(PEDV)ELISA試劑盒

 詳情說(shuō)明

產(chǎn)品名稱(chēng): 豬流行性腹瀉病毒抗體(PEDV)ELISA試劑

貨號: ZK-P6469

英文名稱(chēng): Porcine epidemic diarrhea virus antibody,PEDV ELISA Kit

品牌:子科生物ZIKER;

檢測方法:酶聯(lián)免疫分析檢測法;

規格:48T/96T、96T*2/盒、96T*5/盒?

包裝:盒;

有效期:6個(gè)月/12個(gè)月;

保存溫度 2-8;

應用范圍:本試劑盒用于檢測豬血清、血漿中豬流行性腹瀉病毒抗體(PEDV-Ab),可用于豬流行性腹瀉病毒疫苗免疫效果評價(jià)。

可檢測樣品形式:血清/血漿/組織勻漿/細胞培養上清/相關(guān)生物液體。

 

一、檢測范圍、 OD值:具體請咨詢(xún)在線(xiàn)客服 ,或者來(lái)電索要詳細說(shuō)明書(shū)!

 

二、需自備試劑和器材

1. 標準規格酶標儀。

2. 自動(dòng)洗板機。

3.  37℃恒溫箱。

4. 系列可調節移液器及吸頭,一次檢測樣品較多時(shí),最好用多通道移液器。

5 使用中性 PBS TBS 作為洗滌液。

6  蒸餾水。

7. 吸水紙。

 

三、樣品的準備和保存

樣品如果不立即分析,應分裝后冷凍保存,且避免反復凍融。

細胞培養、組織勻漿、體液——離心去除沉淀,立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

1.  血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿:切割標本后,稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBSPH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

5.  保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,超過(guò)2個(gè)月凍存于-80℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

 

四、操作注意事項

1.  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì )有結晶,這屬于正?,F象,水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。

2.  實(shí)驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

3.  濃度為0S0號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說(shuō)明書(shū)操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍,最終結果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。

4.  嚴格按照說(shuō)明書(shū)中標明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

五、洗板方法

1、手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

2、自動(dòng)洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

 

六、實(shí)驗詳細操作程序

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;樣本孔加待測樣本50μL。

3.  樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。

4.  除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

6.  每孔加入底物A、B50μL,37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長(cháng)處測定各孔的OD值。

 

七、結果判斷:

繪制標準曲線(xiàn):在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線(xiàn)性回歸曲線(xiàn),按曲線(xiàn)方程計算各樣本濃度值。

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